Количествено определяне на нуклеинови киселини в спектрофотометри
Количественото определяне на нуклеиновите киселини е най-често използваната функция на спектрофотометъра. Олигонуклеотиди, едноверижна, двойно-верижна ДНК и РНК могат да бъдат количествено определени в буфери. Абсорбционният пик на най-високия абсорбционен пик на нуклеиновата киселина е 260 nm. Всяка нуклеинова киселина има различен молекулен състав и затова има различни фактори на конверсия. За да се определят количествено различните типове нуклеинови киселини, изберете предварително съответните коефициенти. Например, абсорбцията на lOD е еквивалентна на 50 ug / ml dsDNA, 37 ug / ml ssDNA, 40 ug / ml РНК и 30 ug / ml Olig съответно. Стойността на абсорбцията след изпитването се преобразува чрез горния коефициент, за да се получи съответната концентрация на пробата. Преди тестването, изберете правилната процедура, въведете обема на основния разтвор и разредителя и тествайте разтворите на пробата и пробата. Обаче експериментът не беше лесен. Нестабилните показания може да са най-голямото главоболие за експериментаторите. Колкото по-висока е чувствителността на инструмента, толкова по-голяма е излъчваната абсорбция.
Всъщност, принципът на проектиране и принципът на работа на спектрофотометъра позволяват стойността на абсорбцията да се промени в рамките на определен обхват, т.е. инструментът има определена степен на точност и точност. Като точността на Eppendorf Biophotometer ≤ 1.0% (1A). Резултатите от тези множествени тестове варират между средната стойност от 1,0% и всички са нормални. В допълнение, физикохимичните свойства на нуклеиновата киселина, рН на буфера за разтваряне на нуклеиновата киселина, йонната концентрация и т.н. също трябва да бъдат взети под внимание: По време на теста, твърде висока концентрация на йони също ще доведе до отчитане Движение като ТЕ, което значително ще стабилизира отчитането. Разредената концентрация на пробата също е незначителен фактор: поради неизбежното наличие на малки частици в пробата, особено проби от нуклеинови киселини. Наличието на тези малки частици пречи на тестовия ефект. За да се сведе до минимум влиянието на частиците върху резултатите от теста, абсорбцията на нуклеиновата киселина трябва да бъде най-малко 0.1 А и абсорбцията е за предпочитане 0.1-1.5 А. В този диапазон не трябва да има мехурчета в сместа и няма суспензия в празната проба. В противен случай четенията се движат с насилие; същата колориметрична чаша трябва да се използва за изпитване на празната проба и пробата; в противен случай разликата в концентрацията е твърде голяма; коефициентът на превръщане и единицата на концентрацията на пробата са еднакви; Кюветата, носена от прозореца; обемът на пробата трябва да достигне повече от необходимия минимален обем на цветната чаша и т.н.
В допълнение към концентрацията на нуклеиновата киселина, спектрофотометърът показва няколко много важни съотношения едновременно, за да покаже чистотата на пробата, като например съотношението А260 / А280, за целите на оценката на чистотата на пробата, тъй като пикът на абсорбция на протеина е 280 nm. Чистите проби имат съотношение по-голямо от 1,8 (ДНК) или 2,0 (РНК). Ако съотношението е по-малко от 1,8 или 2,0, то показва наличието на протеини или фенолни вещества. А230 показва, че в пробата има някои замърсители, като въглехидрати, пептиди, феноли и др. Съотношението на чиста нуклеинова киселина А260 / А230 е по-голямо от 2,0. A320 открива мътността на разтвора и други смущаващи фактори. Чистата проба, A320 обикновено е 0.
Фирмата е специализирана в продажбата на спектрофотометри , добре дошли клиенти, които имат нужда да се консултират и купуват, ние ще ви предоставим искрени услуги и качествени продукти, както и по-ниски цени.
Електронна поща: info@sumerlab.com
Уеб: sumerinstrument.com